Использование 5-канальной ПЦР ПЦР ПЦР в реальном времени ПЦР

2023-07-17

Real Time Pcr

Использование 5-канальной ПЦР ПЦР ПЦР ПЦР в режиме реального времени включает в себя следующие шаги:

1. Приготовление образца: экстракт ДНК или РНК из биологического образца, представляющего интерес. Это может быть сделано с использованием различных методов, таких как экстракция фенол-хлороформ, очистка на основе столбцов или магнитная очистка на основе шариков.
2. Праймер и дизайн зонда: конструкция специфических праймеров и зондов, которые будут связываться с интересующей последовательности целевой. Эти праймеры и датчики обычно разработаны с использованием программных инструментов, которые рассматривают такие факторы, как температура плавления, содержание GC и специфичность.
3. Настройка реакции ПЦР: приготовьте реакцию ПЦР, объединив матрицу ДНК или РНК, праймеры, зонды и другие необходимые компоненты, такие как нуклеотиды, буфер и полимераза. Затем реакционную смесь распределяют в скважины пластины ПЦР.
4. Термоцикл: поместите пластину ПЦР в 5-канальный термоциклер, который может разместить несколько образцов одновременно. Затем термоциклер пройдет через серию температурных циклов, включая денатурацию, отжиг и разгибание, чтобы усилить целевую ДНК или РНК -последовательность.
5. Мониторинг в реальном времени: 5-канальный термоциклер оснащен возможностями обнаружения флуоресценции. Во время каждого температурного цикла термоциклер обнаруживает флуоресценцию, излучаемую меченным зондом, когда он связывается с амплифицированной ДНК или РНК. Это позволяет контролировать процесс усиления в реальном времени.
6. Анализ данных: данные флуоресценции в реальном времени собираются и анализируются с использованием специализированного программного обеспечения. Программное обеспечение вычисляет значение порога цикла (CT), которое представляет количество цикла, при котором сигнал флуоресценции пересекает предопределенный порог. Значение КТ используется для количественной оценки начального количества целевой ДНК или РНК в образце.
7. Интерпретация данных: значения КТ, полученные из 5-канального термоцикла, можно сравнить между различными образцами или экспериментальными условиями. Это позволяет количественно определять уровни экспрессии генов, обнаружение специфических мутаций или генетических вариаций или измерение вирусной нагрузки, среди других применений.
В целом, 5-канальная ПЦР PCR PCR в реальном времени является мощным инструментом для различных молекулярных биологических применений, обеспечивающих быстрое и точное количественное определение нуклеиновых кислот.

предыдущий: Использование молекулярной диагностики следующий: Использование Thermocycler PCR в реальном времени QPCR Analyzer PCR PCR